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CK14免疫熒光分析

來源: 發(fā)布時間:2024-01-08

細胞免疫熒光:細胞種板與細胞爬片制備:1) 細胞密度在90%-95%左右,用預熱胰酶消化細胞后重懸細胞于完全培養(yǎng)基中,充分吹打,使之成單細胞懸液,計數(shù)。2)取細胞培養(yǎng)12孔板,在每個孔放爬片的位置根據(jù)爬片的大小,先在每個孔里準備放爬片的位置滴幾滴培養(yǎng)基,然后將爬片置于液滴上,壓緊,使爬片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起,防止加細胞懸液時爬片漂起,造成雙層細胞貼片。根據(jù)自己的需要選擇合適的細胞密度種入12孔板培養(yǎng)板內。3)24h或者48h后,根據(jù)細胞生長速度快慢,觀察判斷細胞密度,約90%時進行細胞免疫熒光。早期的免疫熒光技術是將抗體與示蹤物質結合,用于定位組織或細胞內的抗原物質。CK14免疫熒光分析

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免疫熒光的原理和類型:免疫熒光利用熒光分子或熒光團在一定波長(分子的吸收光譜)下吸收光子的特性,經(jīng)過短暫的間隔(發(fā)射光譜)后以較高的波長發(fā)射光子,并伴隨能量損失。發(fā)射的熒光可通過顯微鏡觀察到。熒光團可以通過可見光或紫外光激發(fā)。具有高光穩(wěn)定性和熒光量子產(chǎn)率的熒光染料可在市場上購買,其激發(fā)較大值跨越從400到>700nm的波長范圍。它們不會損傷活細胞,可安全用于生物制劑。在進行免疫熒光檢測時,首先對細胞或組織進行固定和透化處理。進行免疫染色時,熒光團與目標抗原的抗體結合,然后使用成像顯微鏡觀察熒光信號。根據(jù)使用的抗體和所需的信號擴增,免疫熒光可分為直接和間接兩種類型。CK14免疫熒光分析免疫熒光技術通過熒光信號的觀察來確定抗原或抗體的分布和定位。

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細胞免疫熒光主要用于蛋白定位研究和細胞內信號轉導,細胞免疫熒光技術是利用免疫技術和熒光標記技術相結合,原理就是利用抗原-抗體反應之后,采用熒光標記,標記完成后,顯微鏡下觀察細胞內某種抗原成分的多少,從而做出一個定位研究,也可以為細胞內信號傳導提供一個明確的指導,細胞免疫熒光具有敏感性強、特異性高、速度快的特點,是目前比較常用的組織學技術,也是比較精確的。免疫熒光染色的主要原理是利用抗原抗體之間的特異性結合來顯示目的蛋白,主要包括蛋白和一抗結合,其次是帶有熒光基團的二抗識別并結合一抗,熒光顯微鏡下即可觀察到熒光。

細胞免疫熒光步驟對大家來說一定是很陌生的,他是一種抗原抗體反應,好像對我們來說他顯得很遙遠的樣子,因為我們并不了解他能做什么,通過這種技術可以讓我們對抗原或抗體的性質、定位一次來分析出更多的數(shù)據(jù)。細胞免疫熒光,這對很多人來說都是一次聽說這個東西,也不知道他對我們會有什么好處與壞處,科學研究就是這樣子的,普通老百姓是不會明白其中的道理的,但是這些研究也是確實的在我們的生活中取得了成果,能夠讓大家過的更加舒適。免疫熒光技術在免疫學研究中發(fā)揮重要作用,幫助揭示細胞和分子的功能和相互關系。

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免疫熒光技術又稱熒光抗體技術,是標記免疫技術中發(fā)展較早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。免疫熒光技術是標記免疫技術中發(fā)展較早的一種.它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。Coons等于1941年初次采用熒光素進行標記抗體獲得成功。經(jīng)過幾十年的發(fā)展,該技術已相當成熟。用熒光抗體示蹤或檢查相應抗原的方法稱熒光抗體法;用已知的熒光抗原標記物示蹤或檢查相應抗體的方法稱熒光抗原法。這兩種方法總稱免疫熒光技術。在實際工作中熒光抗原技術很少應用,所以人們習慣將熒光抗體技術稱為免疫熒光技術使用熒光抗體方法是免疫熒光技術中常見的操作步驟。VEGF免疫熒光染色

免疫熒光技術是基于免疫學、生物化學和顯微鏡技術的重要方法之一。CK14免疫熒光分析

免疫熒光-實驗步驟:細胞爬片免疫熒光:在培養(yǎng)板中將已爬好細胞的玻片用PBS浸洗3次,每次5min;(圓蓋片:13mm24孔;18mm12孔;20mm6孔)用4%的多聚甲醛固定爬片15min,PBS浸洗玻片3次,每次5min0.5%TritonX-100(PBS配制)室溫通透20min(細胞膜上表達的抗原省略此步驟);PBS浸洗玻片3次,每次3min,吸水紙吸干PBS,在玻片上滴加3%的BSA(PBS配置),室溫封閉30min5,吸水紙吸掉封閉液,不洗,每張玻片滴加足夠量用PBS稀釋好的一抗并放入濕盒,4℃孵育過夜。加熒光二抗:PBS浸洗爬片3次,每次5min,吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗,濕盒中室溫孵育50min。CK14免疫熒光分析