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體內轉染試劑脂質體

來源: 發(fā)布時間:2024-11-28

**近一項與抗血管生成基因傳遞高度相關的發(fā)現是,陽離子脂質體(CLs)選擇性地靶向**的血管系統(tǒng)。陰離子或電中性脂質體沒有發(fā)現這種作用。Campbell和他的同事[95]發(fā)現,與電中性脂質體相比,使用CLs在**血管內皮細胞(VECs)中積累更多,CLs通過添加5mol%聚乙二醇來穩(wěn)定。在兩種人類**類型(LS174T和MCAIV)和兩個位置(顱窗和背側皮膚褶腔)中發(fā)現了**VECs的選擇性遞送。**血管中囊泡的分布是不均勻的,這可能與該技術是否足以根除足夠數量的**VECs以實現**消退反應有關。有趣的是,注射后24小時,脂質體上50%的摩爾電荷***增加了小鼠肺部的積聚。PEI的分子量對細胞毒性和基因轉移活性有影響。體內轉染試劑脂質體

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此外,病毒濃度被認為是影響轉導效率的另一個因素。在Haas等人的評估中測試的其他幾個參數中,即含有不同輔助蛋白的HIV慢病毒載體構建,纖維連接蛋白片段的存在/不存在以及在人臍帶血和胚胎腎細胞的轉導培養(yǎng)基中添加多陽離子硫酸魚精蛋白,只有病毒滴度似乎與病毒轉導效率直接相關。轉染介質的條件也可能影響轉導效率。例如,在轉導過程中,使用胎牛血清比牛血清產生更好的轉導效率。同樣,研究表明,deae-葡聚糖等多陽離子可以比較大限度地減少帶負電荷細胞之間的排斥力,并促進病毒轉導。影響化學轉染效率的因素中國澳門轉染試劑疫苗超聲輔助轉染涉及在宿主細胞膜上制造微小的孔,以促進核酸(包括DNA和RNA)的傳遞。

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不同種類的納米顆粒轉染細胞系后,產生不同的效率、毒性和組織特異性。這些大量的測試表明,納米顆粒作為載體的效率與普通的非病毒轉染方法相當。Tabatt等人所做的研究比較了使用脂質體、陽離子固體li-pid納米顆粒和兩種商用轉染劑對COS-1細胞系(非洲綠猴腎成纖維細胞樣細胞)使用四種不同的轉染介質所取得的轉染效果。固體脂質na-noparticles轉染組和溶酶體(均由DOTAP -N -(1-(2,3-二聚乙氧基)丙基)-N,N,N-三甲基硫酸銨)轉染組的熒光素酶基因表達效率沒有統(tǒng)計學上的***差異,在每種轉染介質中保持相同水平。然而,獲得的轉染效率低于使用商業(yè)轉染劑EscortTM 的效率,該轉染劑由DOPE(1,2-二-(順式-9-十八烷基)- n-甘油-3-磷酸乙醇胺)組成。研究人員通過在HepG2細胞(人肝細胞肝*細胞系)上使用固體脂質納米顆粒,實現了與市買的lipo-fectamine相同的綠色熒光蛋白和熒光素酶蛋白表達水平。

為了在體外和體內可重復地傳遞基因和siRNA,含有核酸的脂質體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉染試劑。雖然有幾項研究已經調查了血液成分如何使脂質和聚合物納米顆粒不穩(wěn)定,對于介導細胞中基因傳遞或沉默的傳遞系統(tǒng)的**終組成知之甚少。多叢和脂叢的組成在系統(tǒng)給藥進入血液后會發(fā)生不斷的變化。過多的聚合物鏈或脂質體成分不強烈附著于復合物將從顆粒中脫落,而新的成分,如脂蛋白,可以粘附在復合物的表面。這不僅會導致顆粒的不穩(wěn)定,還會改變生物分布或促進體內***。了解在體內遞送的每個階段(在給藥部位,在血液循環(huán)過程中,在***和組織的細胞外基質中,以及**終進入靶細胞時),多聚物和脂聚物的組成如何變化,可能有助于設計具有更高穩(wěn)定性的合成載體系統(tǒng)?;瘜W轉染可分為基于脂質體或非基于脂質體。

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deae-葡聚糖是一種化學修飾的葡聚糖類似物。通過用二乙基氨基乙基修飾,右旋糖酐鏈的酰胺化很容易被質子化,這使得它可以自組裝成帶負電荷核酸的納米顆粒。deae -葡聚糖是***個用于核酸轉染的陽離子聚合物。早在20世紀50年代,它就極大地增強了脊髓灰質炎病毒和SV40病毒DNA在哺乳動物細胞中的轉染。隨后,deae -葡聚糖被廣泛應用于RNA或DNA的轉染。然而,由于以下原因,deae -葡聚糖并沒有作為比較好候選物:轉染效率遠低于脂質體等其他試劑;deae -葡聚糖的細胞毒性和免疫原性不容忽視。小RNA和質粒DNA的共轉染可用于評估轉染效率。蘇州轉染試劑現貨

人類原代干細胞是另一種公認的難以轉染的細胞類型,轉染這種細胞類型的挑戰(zhàn)仍然是效率低和細胞活力低。體內轉染試劑脂質體

基因和RNAi***在臨床上的應用需要安全高效的載體。迄今為止,核酸***的兩種主要方法是基于病毒和非病毒載體。與病毒載體相關的安全問題有很多:誘導免疫反應的風險、不必要的突變和**。因此,在開發(fā)基于脂質或聚合載體的非病毒載體是勢在必行的。1965年,Vaheri和Pagano引入了二乙基氨基乙基修飾的葡聚糖,這是第一種用于基因傳遞的聚合物。1987年,Felgner引入了DOTMA,這是第一種用于DNA轉染的陽離子脂質。從那時起,大量不同的脂質和聚合物被開發(fā)出來。南京星葉生物正是利用將核酸封裝在納米級脂質體囊泡中的技術,開發(fā)出了Gemate系列轉染試劑。體內轉染試劑脂質體