在選擇合適的小RNA分子進(jìn)行轉(zhuǎn)染相關(guān)功能分析之前，應(yīng)先確定其實(shí)驗(yàn)需要。例如，siRNA*對(duì)一個(gè)靶標(biāo)具有高度特異性，而miRNA具有調(diào)節(jié)多個(gè)下游靶標(biāo)的潛力。如今，可以人工合成各種類(lèi)型的短長(zhǎng)度寡核苷酸來(lái)模仿小RNA分子，以研究這些小RNA分子的敲入/敲入/敲出效應(yīng)。常用的寡核苷酸可分為模擬物或拮抗劑。模擬物是一種基于rna的小寡核苷酸(可能是piRNA、miRNA或siRNA)，其結(jié)構(gòu)使其能夠與目標(biāo)mRNA結(jié)合以抑制其功能，從而導(dǎo)致特定基因的翻譯抑制。相反，拮抗劑是一種寡核苷酸，它將與互補(bǔ)的小RNA鏈(如miRNA)結(jié)合以拮抗其活性，從而增加目標(biāo)基因的表達(dá)。陽(yáng)離子聚合物是一種非病毒載體。湖北轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)惠

選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑可能取決于幾個(gè)因素，包括轉(zhuǎn)染核酸的類(lèi)型和轉(zhuǎn)染的復(fù)雜性(單轉(zhuǎn)染或共轉(zhuǎn)染)。一些試劑如Effectene和TransIT-X2是專(zhuān)門(mén)用于質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的，而一些試劑如Lipofectamine RNAiMAX更適合于小寡核苷酸的轉(zhuǎn)染。哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞由于其有限的壽命和有限的擴(kuò)增能力，通常比其他細(xì)胞類(lèi)型更不容易受到轉(zhuǎn)染。非脂質(zhì)體試劑在轉(zhuǎn)染人原代細(xì)胞方面優(yōu)于脂質(zhì)體試劑，包括PEC、HASMC和HAEC、人原代成肌細(xì)胞和AGS。相比之下，據(jù)報(bào)道，基于脂質(zhì)體的試劑(如Lipofectamine和DharmaFECT家族)在轉(zhuǎn)染其他原代人細(xì)胞(如原代臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)和BM-MSC方面比非脂質(zhì)體試劑產(chǎn)生更高的轉(zhuǎn)染效率。山東北京轉(zhuǎn)染試劑deae-葡聚糖是一種化學(xué)修飾的葡聚糖類(lèi)似物。

PLL(聚L -賴(lài)氨酸)是生理?xiàng)l件下帶正電的多氨基酸,當(dāng)鏈長(zhǎng)超過(guò)20個(gè)殘基時(shí)，它可以與質(zhì)粒DNA結(jié)合并凝聚成致密顆粒。研究人員發(fā)現(xiàn)，配體在PLL上的共價(jià)附著可通過(guò)受體介導(dǎo)的途徑***增強(qiáng)內(nèi)吞作用。例如，涎腺樣體(ASOR)是涎腺糖蛋白受體的配體，在肝細(xì)胞上表達(dá)。當(dāng)ASOR共價(jià)附著在PLL上時(shí)，受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用和質(zhì)粒的細(xì)胞攝取***增加。此外，與葉酸或轉(zhuǎn)鐵蛋白相關(guān)的PLL已被開(kāi)發(fā)出來(lái)，并在將pDNAs轉(zhuǎn)染到*細(xì)胞中取得了實(shí)質(zhì)性進(jìn)展。另一種重要的聚氨基酸是PLO(聚L-鳥(niǎo)氨酸)。PLO具有PLL的特性，但轉(zhuǎn)染效率比PLL提高了10倍。Ramsay和Gumbleton證明，與PLL相比，PLO以更低的電荷(+/?)比率凝聚pDNA，并且在相同的多陽(yáng)離子/pDNA質(zhì)量比下，PLO/pDNA復(fù)合物比PLL/pDNA復(fù)合物更耐破壞。然而，由于其介導(dǎo)內(nèi)體逃逸的能力較差，帶正電的多氨基酸的轉(zhuǎn)染效率仍然很低。

不同種類(lèi)的納米顆粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞系后，產(chǎn)生不同的效率、毒性和組織特異性。這些大量的測(cè)試表明，納米顆粒作為載體的效率與普通的非病毒轉(zhuǎn)染方法相當(dāng)。Tabatt等人所做的研究比較了使用脂質(zhì)體、陽(yáng)離子固體li-pid納米顆粒和兩種商用轉(zhuǎn)染劑對(duì)COS-1細(xì)胞系(非洲綠猴腎成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞)使用四種不同的轉(zhuǎn)染介質(zhì)所取得的轉(zhuǎn)染效果。固體脂質(zhì)na-noparticles轉(zhuǎn)染組和溶酶體(均由DOTAP -N -(1-(2,3-二聚乙氧基)丙基)-N,N,N-三甲基硫酸銨)轉(zhuǎn)染組的熒光素酶基因表達(dá)效率沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的***差異，在每種轉(zhuǎn)染介質(zhì)中保持相同水平。然而，獲得的轉(zhuǎn)染效率低于使用商業(yè)轉(zhuǎn)染劑EscortTM 的效率，該轉(zhuǎn)染劑由DOPE(1,2-二-(順式-9-十八烷基)- n-甘油-3-磷酸乙醇胺)組成。研究人員通過(guò)在HepG2細(xì)胞(人肝細(xì)胞肝*細(xì)胞系)上使用固體脂質(zhì)納米顆粒，實(shí)現(xiàn)了與市買(mǎi)的lipo-fectamine相同的綠色熒光蛋白和熒光素酶蛋白表達(dá)水平。不同種類(lèi)的納米顆粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞系后，產(chǎn)生不同的效率、毒性和組織特異性。

影響物理轉(zhuǎn)染或機(jī)械轉(zhuǎn)染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。例如，電穿孔技術(shù)依賴(lài)于電場(chǎng)來(lái)增加宿主細(xì)胞膜的通透性，以?xún)?nèi)化外來(lái)核酸。因此，電穿孔過(guò)程中的電壓和持續(xù)時(shí)間是決定電穿孔成功與否的重要因素。施加高壓的長(zhǎng)時(shí)間電穿孔可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞損傷并降低轉(zhuǎn)染效率。通過(guò)增加電脈沖的數(shù)量也可以提高電轉(zhuǎn)染效率，但這可能會(huì)降低細(xì)胞活力。另一方面，電轉(zhuǎn)染效率取決于所使用的細(xì)胞類(lèi)型，每當(dāng)要電轉(zhuǎn)染一種新的細(xì)胞類(lèi)型時(shí)，應(yīng)優(yōu)化電穿孔條件。一些細(xì)胞如T淋巴細(xì)胞，即使在標(biāo)準(zhǔn)的電穿孔條件下也可能轉(zhuǎn)染不良，而電轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞通常可以產(chǎn)生良好的轉(zhuǎn)染結(jié)果。電穿孔緩沖液的組成是影響轉(zhuǎn)染效率的另一個(gè)關(guān)鍵參數(shù)。據(jù)報(bào)道，電穿孔緩沖液中的ATP酶抑制劑如利多卡因可提高電穿孔后的細(xì)胞活力，而使用K+-based緩沖液的轉(zhuǎn)染效率優(yōu)于Mg2+-based緩沖液。假設(shè)Mg2+離子在***ATP酶以恢復(fù)電穿孔后的離子穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，以比較大限度地減少細(xì)胞死亡，但可能會(huì)降低轉(zhuǎn)染效率。因此，應(yīng)優(yōu)化由多種成分組成的合適的電穿孔緩沖液配方，以確保轉(zhuǎn)染效率和電穿孔后細(xì)胞活力之間的平衡。流式細(xì)胞術(shù)可以更精確地定量表達(dá)特定熒光基因的細(xì)胞，以評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。海南DOTAP 轉(zhuǎn)染試劑

PEI的分子量對(duì)細(xì)胞毒性和基因轉(zhuǎn)移活性有影響。湖北轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)惠

化學(xué)轉(zhuǎn)染可分為基于脂質(zhì)體或非基于脂質(zhì)體?；谥|(zhì)體的轉(zhuǎn)染試劑是一種化學(xué)物質(zhì)，它能夠形成帶正電的脂質(zhì)聚集體，這些聚集體可以與宿主細(xì)胞的磷脂雙分子層順利融合，從而允許外來(lái)遺傳物質(zhì)以**小的阻力進(jìn)入。另一方面，非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑可進(jìn)一步分為幾類(lèi)，包括磷酸鈣、樹(shù)狀大分子、聚合物、納米顆粒和非脂質(zhì)體。磷酸鈣是轉(zhuǎn)染中使用的低價(jià)的化學(xué)物質(zhì)之一，轉(zhuǎn)染涉及將帶正電的鈣離子(Ca2+)與帶負(fù)電的核酸結(jié)合，形成沉淀，然后被宿主細(xì)胞吸收。然而，磷酸鈣轉(zhuǎn)染的成功率較低，需要事先優(yōu)化才能達(dá)到較高的轉(zhuǎn)染效率。樹(shù)狀大分子是三維的、高度支化的有機(jī)大分子，可以與核酸形成復(fù)合物，作為一種替代的非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，它優(yōu)于磷酸鈣。然而，使用樹(shù)狀大分子的轉(zhuǎn)染效率仍然低于病毒載體和脂質(zhì)體試劑。陽(yáng)離子聚合物也可以與帶負(fù)電荷的核酸形成復(fù)合物，這有助于細(xì)胞通過(guò)內(nèi)吞作用吸收遺傳物質(zhì)。與病毒載體相比，陽(yáng)離子聚合物產(chǎn)生的細(xì)胞毒性較小，但效率也較低。納米顆粒由于其體積小，增強(qiáng)了核酸進(jìn)入宿主細(xì)胞的能力，正在成為非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的替代選擇。湖北轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)惠