支原體是實驗室中常見的污染細胞的原核生物，據(jù)統(tǒng)計約有15%-35%的細胞被支原體污染。支原體會改變宿主細胞的結(jié)構和功能等一系列特征，造成實驗結(jié)果不正確；干擾細胞代謝和生長，改變核酸合成，影響細胞抗原性，導致染色體改變，干擾病毒復制以及模仿病毒的作用。因此，每一株外來細胞在進入實驗室之前，都應進行支原體檢測，并且應對培養(yǎng)中的細胞定期（如每2-3個月）進行支原體檢測。建立定期的監(jiān)控方案，有助于提高科研效率，在污染發(fā)生在早期時及時處理?？杀苊庵гw污染造成更大的損失！細胞被支原體污染后的特征及支原體檢測試劑盒使用方法。上海細胞支原體檢測價格
日本藥典JPXVⅢ〈G3-14-170〉對NAT法支原體檢測產(chǎn)品有關性能驗證的要求，包括檢測限（LOD）、專屬性、耐用性、可比性。其中對于專屬性的描述及要求如下：專屬性是指在樣本中能夠明確檢測到目標核酸存在的能力。核酸擴增法的專屬性依賴于引物/探針的選擇和測試條件的嚴謹性(包括擴增和檢測步驟)。選擇特異的及對絕大多數(shù)支原體(柔膜體綱，如支原體屬和相關種屬如解脲支原體，螺原體，無膽甾原體等)保守的序列來設計引物/探針是相當重要的。核酸擴增法檢測支原體種屬的能力應該由章節(jié)中所列的參考支原體的實驗結(jié)果來確認，而不推薦采用引物/探針與數(shù)據(jù)庫比對的方法，(JPXVⅢ提供了用作檢測的建議支原體種類)專屬性。深圳肺炎支原體檢測原理支原體檢測的背景知識與法規(guī)要求。
細胞培養(yǎng)時做支原體檢測是至關重要的。支原體在自然界分布普遍，無細胞壁，直徑為0.1-0.3μm，且形態(tài)易變，極易通過除菌過濾器。細胞培養(yǎng)被支原體污染是極普遍的問題，在細胞培養(yǎng)過程中如果在顯微鏡下發(fā)現(xiàn)破碎的細胞很多，需要頻繁換液才能維持傳代培養(yǎng)的時候，即應懷疑支原體污染。面對支原體污染給細胞培養(yǎng)帶來的巨大難題，世界各國開始重視，并相繼建立了細胞庫，對細胞質(zhì)量進展控制，效果明顯，支原體污染的問題得以限制。目前已知能污染細胞的支原體有20多種以上。細胞培養(yǎng)過程中遇到的支原體95%都來自于以下四種支原體：口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、萊氏無膽甾支原體，其中萊氏無膽甾支原體為牛源性。
中國藥典ChP2020〈9201〉對NAT法支原體檢測產(chǎn)品有關性能驗證的要求，包括檢測限（LOD）、專屬性、耐用性、重現(xiàn)性。其中對于專屬性的定義及驗證方法如下：相同的樣品在正常的實驗條件(如實驗地點、實驗人員、儀器、試劑的批次等)發(fā)生變化時，所得檢驗結(jié)果的精密度。重現(xiàn)性可視為微生物檢驗方法在檢驗結(jié)果上抵抗操作和環(huán)境變化的能力。方法使用者應優(yōu)先測定該驗證參數(shù)。在樣品中接種一定數(shù)量的試驗菌(接種量應在檢測限以上),采用藥典方法和替代方法，分別由不同人員，在不同時間，使用不同的試劑(或儀器)進行檢驗，采用卡方檢驗(檢)來評價兩種方法的重現(xiàn)性是否存在差異。驗證過程中，應關注樣品的一致性。快速支原體檢測試劑盒有哪些？
中國藥典ChP2020〈9201〉對NAT法支原體檢測產(chǎn)品有關性能驗證的要求，包括檢測限（LOD）、專屬性、耐用性、重現(xiàn)性。其中對于專屬性的定義及驗證方法如下：檢測樣品中可能存在的特定微生物種類的能力。當替代方法以微生物生長作為判斷微生物是否存在時，其專屬性驗證時應確認所用培養(yǎng)基的促生長試驗，還應考慮樣品的存在對檢驗結(jié)果的影響。當替代方法不是以微生物生長作為判斷指標時，其專屬性驗證應確認檢測系統(tǒng)中的外來成分不得干擾試驗而影響結(jié)果，如確認樣品的存在不會對檢驗結(jié)果造成影響。采用替代方法進行控制菌的檢驗，還應選擇與控制菌具有類似特性的菌株作為驗證對象。歐洲藥典對支原體檢測的要求有哪些？鄭州qPCR法支原體檢測特點
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常用的支原體檢測方法有傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)法、指示細胞培養(yǎng)法（DNA染色法）、ELISA法、PCR法等。指示細胞培養(yǎng)法（DNA染色法）則靈敏度比較低，因背景熒光的存在，細胞輕度支原體污染不易檢出；細胞裂解死亡產(chǎn)生碎片也會被熒光染料染色被誤認為是支原體染色所致造成假陽性；另外，熒光染色法一般要求培養(yǎng)無污染的指示細胞作為對照，增加了檢測的工作量。目前，PCR法為主流的支原體檢測手段，PCR法比傳統(tǒng)分離培養(yǎng)法檢測時間大縮短，且靈敏度高。上海細胞支原體檢測價格