細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)做支原體檢測(cè)是至關(guān)重要的。支原體在自然界分布普遍，無細(xì)胞壁，直徑為0.1-0.3μm，且形態(tài)易變，極易通過除菌過濾器。細(xì)胞培養(yǎng)被支原體污染是極普遍的問題，在細(xì)胞培養(yǎng)過程中如果在顯微鏡下發(fā)現(xiàn)破碎的細(xì)胞很多，需要頻繁換液才能維持傳代培養(yǎng)的時(shí)候，即應(yīng)懷疑支原體污染。面對(duì)支原體污染給細(xì)胞培養(yǎng)帶來的巨大難題，世界各國(guó)開始重視，并相繼建立了細(xì)胞庫，對(duì)細(xì)胞質(zhì)量進(jìn)展控制，效果明顯，支原體污染的問題得以限制。目前已知能污染細(xì)胞的支原體有20多種以上。細(xì)胞培養(yǎng)過程中遇到的支原體95%都來自于以下四種支原體：口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、萊氏無膽甾支原體，其中萊氏無膽甾支原體為牛源性。為什么要做支原體檢測(cè)？蘇州細(xì)胞支原體檢測(cè)常見問題

常用的支原體檢測(cè)方法有傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)法、指示細(xì)胞培養(yǎng)法（DNA染色法）、ELISA法、PCR法等。分離培養(yǎng)法基本不會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果，因此被譽(yù)為支原體檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)。不過也存在四個(gè)弊端，一是檢測(cè)時(shí)間太長(zhǎng)，支原體要長(zhǎng)出明顯克隆至少需要4周時(shí)間；二是盡管可以檢測(cè)絕大多數(shù)支原體種類，分離培養(yǎng)法也有力所不及的時(shí)候，例如豬鼻支原體(M.hyorhinis)；三是易出現(xiàn)假陽性，因?yàn)樵谂囵B(yǎng)時(shí)需以陽性菌株為對(duì)照，易出現(xiàn)交叉污染；四是對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件要求比較高。杭州支原體檢測(cè)公司歐洲藥典對(duì)支原體檢測(cè)的要求有哪些？

中國(guó)藥典ChP2020〈9201〉對(duì)NAT法支原體檢測(cè)產(chǎn)品有關(guān)性能驗(yàn)證的要求，包括檢測(cè)限（LOD）、專屬性、耐用性、重現(xiàn)性。其中對(duì)于耐用性的定義及驗(yàn)證方法如下：當(dāng)方法參數(shù)有小的刻意變化時(shí)，檢驗(yàn)結(jié)果不受影響的能力，為方法正常使用時(shí)的可靠性提供依據(jù)。方法使用者應(yīng)優(yōu)先測(cè)定該驗(yàn)證參數(shù)。與藥典方法比較，若替代方法檢驗(yàn)條件較為苛刻，則應(yīng)在方法中加以說明。替代方法與藥典方法的耐用性比較不是必須的，但應(yīng)單獨(dú)對(duì)替代方法的耐用性進(jìn)行評(píng)價(jià)，以便使用者了解方法的關(guān)鍵操作點(diǎn)。

用qPCR法進(jìn)行支原體檢測(cè)時(shí)，出現(xiàn)擴(kuò)增曲線異常的可能原因是什么？①如出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增現(xiàn)象，該問題是由反應(yīng)管未蓋緊或密閉性差引起溶液蒸發(fā)而造成。上機(jī)前確保管蓋密閉，反應(yīng)結(jié)束后查看八聯(lián)管或96孔板各管液面是否一致。與設(shè)備硬件相關(guān)，需咨詢硬件供應(yīng)商解決。②如出現(xiàn)擴(kuò)增曲線不平滑現(xiàn)象：可能與ROX加入量不足相關(guān)，個(gè)別設(shè)備有ROX校正功能，不同型號(hào)設(shè)備對(duì)ROX的需求量會(huì)有差異，需設(shè)置實(shí)驗(yàn)摸索合適的ROX加入量。qPCR法支原體檢測(cè)試劑盒的操作流程包括支原體DNA提取、qPCR試劑配制、qPCR加樣及上機(jī)檢測(cè)、結(jié)果分析四個(gè)環(huán)節(jié)。支原體DNA提取包含樣品前處理（離心分離上清等）、樣品裂解液消化、支原體DNA與磁珠結(jié)合、一次洗滌、二次洗滌、洗脫；qPCR試劑在配制時(shí)需先將試劑放置于室溫，避光放置30min，直至試劑融化，各個(gè)試劑組分混勻后按照說明書進(jìn)行配制并分裝。在實(shí)驗(yàn)室，注意分區(qū)操作，降低實(shí)驗(yàn)發(fā)生污染的風(fēng)險(xiǎn)。支原體檢測(cè)試劑盒的適用樣品類型有哪些？

南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測(cè)試劑盒在提取環(huán)節(jié)有哪些注意事項(xiàng)？①洗滌液A/洗滌液B在第    一次使用時(shí)需按照試劑瓶上的標(biāo)識(shí)加入指定量的異丙醇；②磁珠懸浮液不可冷凍、高速離心、長(zhǎng)時(shí)間離心，會(huì)導(dǎo)致磁珠與核酸的結(jié)合能力下降，導(dǎo)致回收率降低；③實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，切勿少加或漏加試劑；④磁力架需是長(zhǎng)形磁鐵，能覆蓋整個(gè)EP管；⑤每次磁分離時(shí)，棄廢液后應(yīng)及時(shí)將EP管從磁力架上取出，避免磁珠長(zhǎng)時(shí)間吸附貼附在管壁上；快速支原體檢測(cè)試劑盒有哪些？寧波豬鼻支原體檢測(cè)操作流程

生物制品支原體檢測(cè)。蘇州細(xì)胞支原體檢測(cè)常見問題

美國(guó)藥典USP40〈1223〉對(duì)NAT法支原體檢測(cè)產(chǎn)品有關(guān)性能驗(yàn)證的要求，包括專屬性、檢測(cè)限（LOD）、耐用性、重現(xiàn)性。其中對(duì)于耐用性、重現(xiàn)性的定義如下：耐用性：一種方法不受方法參數(shù)(如試劑體積、孵育時(shí)間或環(huán)境溫度)微小但有意變化影響的能力，該方法在正常使用過程中可表明其可靠性。對(duì)耐用性的衡量不是對(duì)藥典方法和替代方法的比較；相反，它是備用方法驗(yàn)證的必要組成部分，以便用戶了解該方法的操作參數(shù)的限制。重現(xiàn)性：在不同的典型測(cè)試條件下，如不同的分析儀(例如，三個(gè))、儀器和試劑批次(演示方法可以遵循儀器或材料供應(yīng)商的建議，也可以完全基于測(cè)試方法制造商提供的數(shù)據(jù)),對(duì)相同樣品進(jìn)行分析得到的測(cè)試結(jié)果的精確程度。蘇州細(xì)胞支原體檢測(cè)常見問題