低成本國產(chǎn)產(chǎn)品同樣實現(xiàn)Simoa的高靈敏蛋白因子檢測功能

來源：發(fā)布時間：2025-01-10

Simoa（Single-molecule Array）技術(shù)是由美國Quanterix公司研發(fā)生產(chǎn)的一款超高靈敏度單分子蛋白質(zhì)檢測技術(shù)，采用經(jīng)典的雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）實現(xiàn)極低含量的蛋白定量檢測。其關(guān)鍵技術(shù)在于將免疫復(fù)合物捕獲并密封在一個飛升級別的小孔中反應(yīng)，以實現(xiàn)單個分子的檢測，大幅提升檢測靈敏度，比傳統(tǒng)ELISA方法靈敏度高出1000倍，檢測下限達(dá)到fg/mL，實現(xiàn)了很低豐度蛋白的有效檢測和定量，為低豐度炎癥因子的實時監(jiān)控提供了技術(shù)支撐。

芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA與傳統(tǒng)免疫試驗主要區(qū)別在于能夠在飛升大小的孔中捕獲單個分子，允許單個磁珠信號的數(shù)字化讀取。用特異性抗體修飾的微珠捕獲靶標(biāo)生物標(biāo)志物，在生物標(biāo)志物濃度很少時，每個珠子能捕獲一個或零個靶蛋白質(zhì)分子，通過免疫反應(yīng)后形成免疫復(fù)合物，然后用能夠產(chǎn)生熒光產(chǎn)物的量子點報告信號。通過把單個珠子限定在飛升反應(yīng)室中，通過微阱芯片結(jié)構(gòu)“卡住”微珠，使得微珠陣列化排布的方式，使用熒光成像來檢測單個格子的熒光信號進(jìn)行更后定量。這種一個陣列化區(qū)域預(yù)埋一種特異性抗體修飾的微珠，一個通道內(nèi)可以設(shè)計多個這樣的陣列化區(qū)域，不同區(qū)域間預(yù)埋不同捕獲抗體的微珠。這種基于酶聯(lián)免疫吸附試驗的數(shù)字化單分子檢測方法（Digital ELISA）在幾十微升的樣品中檢測到少至約 10-20個量子點標(biāo)記的復(fù)合物。

芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA超敏功能：芯棄疾.數(shù)字ELISA，與Simoa同樣的檢測方案，將檢測結(jié)果二維化；

使用成像方式，可精確量檢測區(qū)多少個微球載體上發(fā)生免疫反應(yīng)，具有陽性熒光信號，

理論可達(dá)fg級；

使用常規(guī)ELISA試劑，測試IL-6等演示指標(biāo)，也可輕松達(dá)到亞pg級（0.2-0.5pg/mL)

數(shù)字 ELISA 試劑盒的優(yōu)點

節(jié)省時間 - 從樣品到結(jié)果只需30分鐘

節(jié)省樣本 - 只需低至10μL的樣品體積

多重檢測 - 同時檢測10種生物靶標(biāo)

高靈敏度 - 精確定量下限低至0.2pg/mL

高通量- 可選擇4，8，16通道芯片同時檢測

操作簡便 - 全自動化儀器加樣清洗，或者選擇人工加樣清洗

芯棄疾JX-8B與Luminex，MSD，Simoa，傳統(tǒng)ELISA不同檢測蛋白技術(shù)比較，在靈敏度，檢測時間，檢測成本上更顯優(yōu)勢。

芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA與Simoa 工作流程步驟的比較表。

芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA試劑盒的5個步驟	Simoa需 6 個步驟
1.樣本和標(biāo)記抗體的量子點混合孵育5-10min	1.利用表面標(biāo)記有捕獲抗體的磁珠捕獲樣品中的抗原
2.全自動化加樣或者移液槍加樣	2.使用biotin標(biāo)記的檢測抗體對被捕獲的抗原進(jìn)行標(biāo)記
3.孵育5-10min	3.加入鏈霉親和素-半乳糖苷酶復(fù)合物，與檢測抗體上的biotin結(jié)合
4.清洗10min	4. 將反應(yīng)洗凈后的磁珠與底物混合，加載到含有微孔陣列的檢測芯片中，利用磁場使磁珠落入與其尺寸完全匹配的微孔中（3μm左右），加入油相，使得微孔之間物理隔離
5.拍照計數(shù)	5.含有半乳糖苷酶的微孔由于酶分子催化底物產(chǎn)生熒光產(chǎn)物
	6.對微孔陣列進(jìn)行熒光成像，通過對發(fā)出熒光信號的微孔個數(shù)對照標(biāo)準(zhǔn)曲線來實現(xiàn)定量檢測。

芯棄疾JX-8B和Simoa主要參數(shù)對比。

比較項目	芯棄疾JX-8B	Simoa
比較低檢測下限	0.2 pg/mL	0.002 pg/mL
耗時	0.5 h	1-1.5 h
所需樣品體積	10 μL	1-100 μL
理論重數(shù)	10	10
線性范圍	4 log	2～4 log
設(shè)備耗材成本	低(包括全自動加樣儀+熒光掃描儀)	超高

Simoa 可檢測非常低濃度的分析物，產(chǎn)品開發(fā)較成熟，但是檢測操作流程過于繁瑣復(fù)雜，單次檢測耗時長達(dá)1h以上，使用的盤式微流控芯片加工精度高，生產(chǎn)成本高昂。

芯棄疾JX-8B檢測成本降低到Simoa的十分之一，檢測時間縮短到0.5h，提高檢測的效率，靈敏度達(dá)到亞飛克級別，滿足大多數(shù)的項目檢測要求。

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